如何為Western Blotting選擇最佳的濾膜？

蛋白質(zhì)印跡是一個(gè)術(shù)語(yǔ)，是指用于樣品中蛋白質(zhì)檢測(cè)的分析技術(shù)。生物樣品從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上，以便在其表面緊密檢測(cè)。這是蛋白質(zhì)分析的常規(guī)過程，可提供有關(guān)給定樣品的半定量和定量數(shù)據(jù)。為確保此過程的準(zhǔn)確性，請(qǐng)選擇zui佳類型的膜以傳遞所需的信號(hào)。它必須同時(shí)抵抗非特異性和背景結(jié)合。該選擇很大程度上取決于蛋白質(zhì)樣品的特性和該過程中預(yù)期的下游檢測(cè)。

在Western印跡中選擇PVDF膜的因素：

蛋白質(zhì)印跡優(yōu)選使用兩種主要類型的膜。它們是硝酸纖維素膜和PVDF或聚偏二氟乙烯膜。在這兩個(gè)之中選擇zui佳選擇需要考慮以下特定因素：

評(píng)估蛋白質(zhì)結(jié)合能力：

如果您需要更高的結(jié)果靈敏度，則zui好使用PVDF濾膜，因?yàn)樗鼈兙哂泻芨叩牡鞍踪|(zhì)結(jié)合能力。這些過濾器的容量為170-200μg/ cm2。這種能力使PVDF注射器過濾器可以檢測(cè)低表達(dá)的蛋白質(zhì)。在借助PVDF膜進(jìn)行抗體檢測(cè)的步驟中，您還將獲得很高的背景噪音。另一方面，硝化纖維過濾器中的背景噪聲可能會(huì)略低，但它們不允許PVDF的檢測(cè)靈敏度。

評(píng)估身體特征：

已知PVDF過濾器比大多數(shù)其他過濾器類型更耐用，更堅(jiān)固。它們?yōu)闇y(cè)序目的提供了更好的耐化學(xué)性。您可以剝離并探測(cè)這些膜而不會(huì)造成信號(hào)損失。當(dāng)暴露于刺激性化學(xué)物質(zhì)時(shí)，PVDF過濾器可以維持處理并保持彈性。因此，在進(jìn)行zui終選擇之前，請(qǐng)?jiān)诋a(chǎn)品資料中檢查其物理特性。

詢問孔尺寸：

通常，這兩種硝化纖維素和PVDF注射器過濾接 ?可以以各種孔徑大小被發(fā)現(xiàn)。您必須根據(jù)樣品的物理特性選擇合適的尺寸。尺寸范圍可以從0.1um至0.45um。對(duì)于大多數(shù)蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用，理想的孔徑是0.45。但是，對(duì)于低分子量的樣品，優(yōu)選使用0.1或0.2 um的孔徑。

評(píng)估綁定屬性和膜格式：

蛋白質(zhì)分子將通過偶極和疏水相互作用與PVDF膜結(jié)合。因此，進(jìn)行選擇時(shí)請(qǐng)仔細(xì)檢查此功能。在這里，您還必須考慮在該過程中使用的膜格式。它取決于靈活性，價(jià)格，便利性和要使用的傳輸系統(tǒng)。選擇預(yù)先潤(rùn)濕的過濾器，以在應(yīng)用中獲得更大的通量，便利性和靈活性。預(yù)切膜是減少工藝時(shí)間并確保更高重現(xiàn)性的可行選擇。

因此，當(dāng)檢測(cè)高分子量蛋白質(zhì)時(shí)，PVDF過濾器是從應(yīng)用中獲得理想結(jié)果的zui佳選擇。